磷酸化蛋白提取试剂盒
产品货号:15231
产品规格:50T/100T
产品简介:本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。产品组成:试剂名称 50T 100T 保存条件裂解液 50mL 100mL 2~8℃磷酸酶抑制剂(100×) 0.5mL 1mL -20℃蛋白酶抑制剂(100×) 0.5mL 1mL -20℃PMSF(100×) 0.5mL 1mL -20℃操作步骤:在 1mL 的冷裂解液中各加入 10µL 的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和 PMSF;混匀,放置在冰上备用;1. 组织总蛋白的提取1) 称取 0.1g 的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入 0.5-1mL的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;2) 将组织匀浆液移入 1.5mL 的 EP 管中,4℃12000g 离心 30min;3) 吸取上清至新的管中;4) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)2. 细胞总蛋白的提取1) 裂解液的用量:107个细胞需要裂解液 1mL;2) 贴壁细胞:弃去培养基,用冷的 PBS 洗两次,弃去 PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,将刮离的细胞裂解液移入 EP 管中,颠倒裂解 20-30min。3) 悬浮细胞:4℃400g 离心收集细胞,用冷的 PBS 洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,涡旋 10s,放置冰上裂解 10min,重复 3-4 次;4) 裂解完毕之后,将细胞裂解液 4℃12000g 离心 30min;5) 将上清移入新的 EP 管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
注意事项:1. 实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境。2. PSMF(有毒)现用现加,因为 PMSF 在水溶液中会快速降解。有效期:12 个月有效。