磷酸化蛋白提取试剂盒

磷酸化蛋白提取试剂盒

 产品货号：15231 

产品规格：50T/100T 

产品简介：本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为强烈，可获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。产品组成：试剂名称 50T 100T 保存条件裂解液 50mL 100mL 2~8℃磷酸酶抑制剂（100×） 0.5mL 1mL -20℃蛋白酶抑制剂（100×） 0.5mL 1mL -20℃PMSF（100×） 0.5mL 1mL -20℃操作步骤：在 1mL 的冷裂解液中各加入 10µL 的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和 PMSF；混匀，放置在冰上备用；1. 组织总蛋白的提取1) 称取 0.1g 的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入 0.5-1mL的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作；2) 将组织匀浆液移入 1.5mL 的 EP 管中，4℃12000g 离心 30min；3) 吸取上清至新的管中；4) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）2. 细胞总蛋白的提取1) 裂解液的用量：107个细胞需要裂解液 1mL；2) 贴壁细胞：弃去培养基，用冷的 PBS 洗两次，弃去 PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入 EP 管中，颠倒裂解 20-30min。3) 悬浮细胞：4℃400g 离心收集细胞，用冷的 PBS 洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋 10s，放置冰上裂解 10min，重复 3-4 次；4) 裂解完毕之后，将细胞裂解液 4℃12000g 离心 30min；5) 将上清移入新的 EP 管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）

 注意事项：1. 实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。2. PSMF（有毒）现用现加，因为 PMSF 在水溶液中会快速降解。有效期：12 个月有效。