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Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

简要描述:Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresisSDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶;非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋

产品型号: 15195-30

所属分类:蛋白类

更新时间:2021-11-04

厂商性质:生产厂家

详情介绍

Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

产品货号:15195

 

产品规格:30T/150T

 

产品简介:

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresisSDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶;非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开,主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。常规 SDS-PAGE 凝胶电泳适用于分离大分子蛋白,对于小分子量的蛋白或多肽,分辨率大大降低。

尚宝生物 Tricine-SDS-PAGE电泳能够较好的分离10KD以下的蛋白或多肽,是电泳法分离多肽的主要方法,30T一般可以配制3035块胶,具体配制的量应根据器具大小决定。电泳分离后可直接考马斯亮蓝染色、银染等。

 

产品组成:

名称

30T

保存条件

试剂(A): 49.5%T 3%C

20ml

4℃

试剂(B): 49.5%T 6%C

60ml

4℃

试剂(C): Gel buffer

90ml

4℃

试剂(D): Glycerol

20ml

室温

试剂(E): Ammonium Persulfate

0.3g

室温

试剂(F): TEMED

2×1ml

4℃,避光

 

操作步骤(仅供参考)

1. 配制10%过硫酸铵(APS):直接在0.3g Ammonium Persulfate中加入3ml蒸馏水,充分溶解,分装成小份储存于-20℃4℃。注意:一般用1.5mlEP管分装成0.5-1ml每支,-20℃保存,每支使用2-3次即弃用。短期使用时,可保存于4℃1周有效。

2. 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,按照附表配制分离胶:

将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%CGel bufferGlycerol加入到离心管中充分混合。

加入10%APSTEMED,立即涡旋混匀510s,以使溶液充分混匀。

在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel,分离胶溶液加约4ml),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层13cm的水层,使凝胶表面保持平整。

静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

3. 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,按照附表配制夹层胶:

去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水尽量吸去。

将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%CGel buffer加入到离心管中混合。

加入10%APSTEMED,立即涡旋混匀510s,以使溶液充分混匀。

将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于1mmmini-gel,夹层胶溶液加约1ml),然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层12cm的水层,使凝胶表面保持平整。

静置,待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

 

4. 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,按照附表配制浓缩胶:

去除覆盖在夹层胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。

将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%CGel buffer加入到离心管中混合。

加入10%APSTEMED,立即涡旋混匀510s,以使溶液充分混匀。

将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

静置,待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,避免破坏加样孔。进行电泳操作。

5. 电泳

将电泳槽置于4℃或冰水浴中,外槽加入阳极缓冲液,内槽加入阴极缓冲液,30V预电泳10min,将处理好的样品加入点样孔,30V电泳1h100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

附表 Tricine-SDS-PAGE 凝胶配方表

成份

分离胶

夹层胶

浓缩胶

浓度/体积

20%/4.5ml   16.5%/4.5ml   15.5%/4.5ml

10%/2ml

10%/2ml

49.5%T 3%C

                      

0.407ml

0.16ml

49.5%T 6%C

1.82ml        1.5ml      1.395ml

Gel buffer

1.5ml         1.5ml      1.5ml

0.667ml

0.496ml

Glycerol

0.48ml        0.48ml     0.48ml

蒸馏水

0.7ml         1.02ml     1.125ml

0.926ml

1.344ml

10%APS

40μl         40μl      40μl

20μl

20μl

TEMED

5μl           5μl       5μl

3μl

3μl

 

注意事项:

1. 过硫酸铵配制成10%APS溶液后应当-20℃保存,用2~3次,亦可4℃保存几天。

2. TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切。可通过适当调节TEMED 的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

3. 配制聚丙烯凝胶的过程中,如果室温较低,可以置于37℃放置,加速凝固。在液体混匀的时候应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢,速度不宜过快。

5. 49.5%T 3%C 49.5%T 6%C为不同比例的Acr-Bis,有轻微神经毒性,请小心操作。

 

有效期:6个月有效。

 




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