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RIPA裂解液(强)

RIPA裂解液(强)

简要描述:RIPA裂解液(强)多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,如 Triton、SDS、NP-40等。RIPA 裂解液(强)(RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA 裂解液(中)。所获得的蛋白质可用于 Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。

产品型号: T0013B

所属分类:蛋白类

更新时间:2021-11-04

厂商性质:生产厂家

详情介绍

RIPA裂解液()

产品货号T0013B

 

产品包装50ml/100ml/500ml

 

产品简介:

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,如 TritonSDSNP-40等。RIPA 裂解液((RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA 裂解液()。所获得的蛋白质可用于 Western,免疫沉淀(Immunol PrecipitationIP)等。

Medium RIPA Lysis Buffer主要由Tris NP-40sodium deoxycholate 等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

 

产品组成:

试剂名称

50ml

100ml

500ml

保存条件

Weak RIPA Lysis Buffer

50ml

100ml

500ml

-20

PMSF(100mM)

0.75ml

1.5ml

7.5ml

-20

 

操作步骤(仅供参考):

()贴壁培养细胞

1. Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM

2. 去除贴壁细胞的培养液,用PBSNS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清, 留取沉淀。

3. 按照6孔板每孔加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入 RIPA Lysis Buffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解,通常裂解液作用于细胞13s内,细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl

4. 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5. 后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()悬浮培养细胞

1. Weak RIPA Lysis Buffer置室温溶解混匀后,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM

2. 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

3. 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Weak RIPA Lysis Buffer 。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4. 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5. 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()组织样本

1. Enhanced Lysis Buffer置于室温溶解混匀后,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM

2. 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。

3. 按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解1530min

4. 步骤34亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSFEnhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。

5. 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

6. 进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事项:

1. 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

3. 如果细胞量较多,必需分装成50100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。

5. 溶解RIPA Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。

6. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-KBp53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

7. 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。

 

有效期

12个月有效。 

 

 




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