欢迎光临上海尚宝生物科技有限公司网站!
诚信促进发展,实力铸就品牌
服务热线:

13671551480

产品分类

Product category

相关文章

Related articles

产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > > 细胞类 > T15197-100Triton-SDS细胞裂解液
Triton-SDS细胞裂解液

Triton-SDS细胞裂解液

简要描述:Triton-SDS细胞裂解液由Triton X-100、SDS、Tris-HCl等组成,并含有蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用TritonX-100破坏脂质双分子层,溶解胞质和细胞膜,破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。其浓度在0.1%~1%时即可满足几乎所有溶解的需求,且可补充等离子浓度的盐及使pH接近中性。

产品型号: T15197-100

所属分类:细胞类

更新时间:2021-11-01

厂商性质:生产厂家

详情介绍

Triton-SDS 细胞裂解液

产品货号:T15197

 

产品规格:100ml

 

产品简介:

Triton-SDS细胞裂解液由Triton X-100SDSTris-HCl等组成,并含有蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用TritonX-100破坏脂质双分子层,溶解胞质和细胞膜,破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。其浓度在0.1%1%时即可满足几乎所有溶解的需求,且可补充等离子浓度的盐及使pH接近中性。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳,Western,免疫沉淀 (ImmunolPrecipitationIP)和免疫共沉淀(co-IP)等。不宜用Bradford法测定由Triton-SDS细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。

 

产品组成:

名称

规格

保存条件

Triton-SDS Lysis Buffer

100ml

-20

PMSF(100mM)

1.5ml

-20

 

操作步骤(仅供参考)

()贴壁培养细胞

1. Triton-SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM

2. 去除培养液,用 PBSNS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。

3. 按照6孔板每孔加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例加入riton-SDS LysisBuffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于细胞13s内,细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl

4. 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5. 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()悬浮培养细胞

1. Triton-SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM

2. 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

3. 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Triton-SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200250μl

4. 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5. 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()组织样本

1. Triton-SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM

2. 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。

3. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在12min 之内,以减少蛋白的降解。

4. 按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解1530min

5. 步骤34亦可以采用如下过程:按照每20mg 组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSFTriton-SDS

 

 

Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。

6. 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

7. 进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事项:

1. 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

3. 如果细胞量较多,必需分装成50100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

5. 溶解Triton-SDS Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。

6. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验。如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。

7. 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。

 

有效期: 12个月有效。

 

 




留言询价

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

联系我们

contact us

咨询电话

400-6110007

扫一扫,关注我们

返回顶部