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邻苯二甲醛试剂

邻苯二甲醛试剂

简要描述:邻苯二甲醛试剂胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇,是一种环戊烷多氢菲的衍生物,分子式C27H46O,分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内,其中脑、神经组织肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。

产品型号: T16684-100

所属分类:常规溶液

更新时间:2021-09-22

厂商性质:生产厂家

详情介绍

邻苯二甲醛试剂

产品货号: T16684

 

产品规格:100ml

 

产品简介:

胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇,是一种环戊烷多氢菲的衍生物,分子式C27H46O分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内,其中脑、神经组织,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。

邻苯二甲醛试剂属于总胆固醇检测(邻苯二甲醛比色法)的核心成分之一,检测原理是胆固醇及其脂,在强酸存在下与邻苯二甲醛反应,产生紫红色化合物,该化合物在550nm波处有最大吸收峰,分光光度计在550nm处进行比色测定,胆固醇含量在4mg/ml之内与吸光呈良好线性关系。本试剂用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。该检测优点是:1、操作简便;2、灵敏;3、稳定;4、无需将胆固醇单独抽提出来或去除样品中的蛋白质。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

产品名称

规格

保存条件

试剂(A): 邻苯二甲醛粉剂

100mg

4℃,避光

试剂(B): 邻苯二甲醛稀释液

100ml

室温

自备材料:

1. 蒸馏水

2. 生理盐水或PBS

3. 试管或离心管

4. 浓硫酸

5. 分光光度计

 

操作步骤(仅供参考)

1. 样本处理:

血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水稀释后检测。

细胞样本:

a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。

b、用PBS 或生理盐水清洗1~2次,1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。

c、加入200~300μ lPBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复3~5次。亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心,待用。亦可用1~2% Triton X-100 冰浴30~60min,制备好的裂解液不可离心,待用。

组织样本:准确称取适量组织样本,按质量(g):生理盐水=14的比例,加入生理盐水,冰浴条件下手动或机械匀浆。2500~3000g离心10min,取上清待用。

2. 配制胆固醇标准工作液。

3. 配制邻苯二甲醛工作液:取1(10mg)邻苯二甲醛粉剂的准确加入邻苯二甲醛稀释液10ml,充分混匀,即为邻苯二甲醛工作液。4℃避光保存,2周有效。

4. 配制强酸工作液:取适量的TC assay buffer和浓硫酸等量混合,即为强酸工作液。注意:本试剂盒不提供浓硫酸,需用户自备。二者混合时,一定小心操作,以免误伤自己。配制好的强酸工作液工作液中的硫酸含量应准确,否则有可能影响显色效果。

5. 分光光度计胆固醇测定操作:

按下表依次加入试剂:

加入试剂(ml

空白管

标准管

待测管

蒸馏水

0.006



系列胆固醇标准工作液


0.006


待测血清或其他样本



0.006

TC assay buffer

0.24

0.24

0.24

邻苯二甲醛工作液

0.12

0.12

0.12

强酸工作液

2.4

2.4

2.4

充分混匀, 静置10min。以分光光度计,1cm比色杯测定550m吸光度,以空白管调零读取标准管和各待测管的吸光度。

 

计算: 以吸光度为纵坐标,以胆固醇浓度为横坐标,作标准曲线。对照标准曲线即知待测样本的浓度。

 

注意事项:

1. 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

2. 本法可直接用于检测脑脊液中的TC 含量,也可直接检测尿液中的TC含量。

3. 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。

4. 如果样本TC浓度过高,结果可能呈假性降低,应用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

 

效期:12个月有效。

 




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