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腺苷三磷酸酶染色液(ATPase,钙钴法)

腺苷三磷酸酶染色液(ATPase,钙钴法)

简要描述:腺苷三磷酸酶染色液(ATPase染色液,钙钴法),是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键,因而释放大量能量。其催化反应如下:A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3

产品型号: R22024-5×50

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-09-15

厂商性质:生产厂家

详情介绍

腺苷三磷酸酶染色液(ATPase染色液,钙钴法)

 

产品货号:R22024

 

产品规格:5×50ml

 

产品简介:

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphataseATPase)是一种水解酶,是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键,因而释放大量能量。其催化反应如下:A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量。

ATPase染色(钙钴法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再被置换为磷酸钴,最终产物为黑色沉淀。

 

产品组成:

名称

5×50ml

保存条件

试剂(A): 碱性预孵育液

50ml

室温,避光

试剂(B): 酸性预孵育液

50ml

室温

试剂(C): ATPase孵育液

50ml

4℃,避光

试剂(D): Co溶液

50ml

室温

试剂(E): ALP硫化溶液

2×1ml

室温,避光

试剂(F): ATPase对照液

10ml

4℃,避光

 

操作步骤(仅供参考):

1. 冰冻切片直接入蒸馏水。

2. 一张切片入碱性预孵育液室温孵育15min。另一张切片入酸性预孵育液室温孵育5min,再入碱性预孵育液 30s

3. 切片同时入ATPase孵育液,孵育30-45min

4. 1%氯化钙洗三次,每次1min。。

5. Co溶液3min,蒸馏水充分洗4-5次,流水冲洗2min

6. 在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(E)用蒸馏水稀释50, 即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育 1-2min

7. 流水洗10min后,入蒸馏水。

8. 切片经95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。

9. 二甲苯透明,树胶封片。

 

染色结果:

酶所在阳性部位   黑色沉淀

 

 

 

 

肌纤维分型:

肌纤维分型

碱性预孵育液

酸性预孵育液

+

+++

ⅡA

+++

-

ⅡB

+++

-

ⅡC

+++

++

阴性对照(可选)

1. 取对照切片,用试剂(F)-ATPase对照液进行孵育,并与用ATPase孵育液孵育的切片进行比较。

两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在,两者不同部位才是ATP酶活性所在。

2. 将切片入80℃蒸馏水10min,再与其他组织切片同时孵育,结果应为阴性。

 

注意事项

1. 切片入孵育液前后不可用水冲洗。

2. 若要显示肌肉ATPase新鲜组织必须速冻后切片。

3. 若要鉴别肌纤维所属类型,最好用连续冰冻切片。应减少切片在室温暴露的时间。

4. ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小份储存,一经开启立即使用。

5. ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保质期:6个月有效。

 




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