腺苷三磷酸酶染色液(ATPase染色液,钙钴法)
产品货号:R22024
产品规格:5×50ml
产品简介:
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一种水解酶,是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键,因而释放大量能量。其催化反应如下:A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量。
ATPase染色(钙钴法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再被置换为磷酸钴,最终产物为黑色沉淀。
产品组成:
名称 | 5×50ml | 保存条件 |
试剂(A): 碱性预孵育液 | 50ml | 室温,避光 |
试剂(B): 酸性预孵育液 | 50ml | 室温 |
试剂(C): ATPase孵育液 | 50ml | 4℃,避光 |
试剂(D): Co溶液 | 50ml | 室温 |
试剂(E): ALP硫化溶液 | 2×1ml | 室温,避光 |
试剂(F): ATPase对照液 | 10ml | 4℃,避光 |
操作步骤(仅供参考):
1. 冰冻切片直接入蒸馏水。
2. 一张切片入碱性预孵育液室温孵育15min。另一张切片入酸性预孵育液室温孵育5min,再入碱性预孵育液 30s。
3. 切片同时入ATPase孵育液,孵育30-45min。
4. 1%氯化钙洗三次,每次1min。。
5. 入Co溶液3min,蒸馏水充分洗4-5次,流水冲洗2min。
6. 在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育 1-2min。
7. 流水洗10min后,入蒸馏水。
8. 切片经95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。
9. 二甲苯透明,树胶封片。
染色结果:
酶所在阳性部位 黑色沉淀
肌纤维分型:
肌纤维分型 | 碱性预孵育液 | 酸性预孵育液 |
Ⅰ型 | + | +++ |
ⅡA型 | +++ | - |
ⅡB 型 | +++ | - |
ⅡC 型 | +++ | ++ |
阴性对照(可选):
1. 取对照切片,用试剂(F)-ATPase对照液进行孵育,并与用ATPase孵育液孵育的切片进行比较。
两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在,两者不同部位才是ATP酶活性所在。
2. 将切片入80℃蒸馏水10min,再与其他组织切片同时孵育,结果应为阴性。
注意事项:
1. 切片入孵育液前后不可用水冲洗。
2. 若要显示肌肉ATPase新鲜组织必须速冻后切片。
3. 若要鉴别肌纤维所属类型,最好用连续冰冻切片。应减少切片在室温暴露的时间。
4. ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小份储存,一经开启立即使用。
5. ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保质期:6个月有效。