腺苷三磷酸酶染色液（ATPase，钙钴法）

腺苷三磷酸酶染色液（ATPase染色液，钙钴法）

产品货号：R22024

产品规格：5×50ml

产品简介：

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一种水解酶，是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键，因而释放大量能量。其催化反应如下：A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量。

ATPase染色(钙钴法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再被置换为磷酸钴，最终产物为黑色沉淀。

产品组成:

操作步骤（仅供参考）:

1. 冰冻切片直接入蒸馏水。

2. 一张切片入碱性预孵育液室温孵育15min。另一张切片入酸性预孵育液室温孵育5min，再入碱性预孵育液 30s。

3. 切片同时入ATPase孵育液，孵育30-45min。

4. 1%氯化钙洗三次，每次1min。。

5. 入Co溶液3min，蒸馏水充分洗4-5次，流水冲洗2min。

6. 在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液孵育 1-2min。

7. 流水洗10min后，入蒸馏水。

8. 切片经95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。

9. 二甲苯透明，树胶封片。

染色结果：

酶所在阳性部位   黑色沉淀

肌纤维分型：

阴性对照(可选)：

1. 取对照切片，用试剂(F)-ATPase对照液进行孵育，并与用ATPase孵育液孵育的切片进行比较。

两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在，两者不同部位才是ATP酶活性所在。

2. 将切片入80℃蒸馏水10min，再与其他组织切片同时孵育，结果应为阴性。

注意事项：

1. 切片入孵育液前后不可用水冲洗。

2. 若要显示肌肉ATPase新鲜组织必须速冻后切片。

3. 若要鉴别肌纤维所属类型，最好用连续冰冻切片。应减少切片在室温暴露的时间。

4. ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小份储存，一经开启立即使用。

5. ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保质期：6个月有效。