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伊文思蓝染色液(0.5)

伊文思蓝染色液(0.5)

简要描述:伊伊文思蓝染色液(0.5)又称偶氮蓝,分子式C34H24N6Na4O14S4,分子量为960.80,CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小不血浆白蛋白相近,而且在血液中不血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。

产品型号: R22115-500

所属分类:常规溶液

更新时间:2021-09-15

厂商性质:生产厂家

详情介绍

伊文思蓝染色液(0.5%)

产品货号:R22115

 

产品规格:100ml/500ml

 

产品简介:

    伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式C34H24N6Na4O14S4,分子量为960.80CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小不血浆白蛋白相近,而且在血液中不血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量,也可作动脉插管的定位。正常情况下血浆白蛋白无法透过血脑屏障,所以染色后如果神经系统血脑屏障完整,不血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其着色。相反,如果神经系统血脑屏障被破坏,依文思蓝就可以进入神经系统并使其着色。在荧光波长470nm540nm处有强峰,680 nm处有弱峰。可以使用化学透析法和比色法进行检测。

伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,其中0.5%为最的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞不活细胞,但无法区分死亡不坏死。

 

产品组成:

名称

规格

保存条件

伊文思蓝染色液(0.5%)

100ml/500ml

4℃,避光

 

 

 

 

自备材料:

1. 注射器、组织匀浆器

2. PBS

3. 或丙酮

 

操作步骤(仅供参考)

()血脑屏障通透性

1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射Evans Blue Stain (0.5%)数秒至1分钟内,小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.51h后处死小鼠,取目的脑组织。

2. 脑组织置于1.5ml离心管中,加入1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,1000g离心15min

3. 取上清,加入等量三,4℃孵育1824h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室温孵育24h

4. 1000g离心2030 min2000g离心15min

5. 取上述溶液12ml,用分光光度计测620 nm处吸光值(OD)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。

()活细胞染色

1. 100μl重悬细胞到常规1.5ml0.5ml离心管内,入100μl Evans Blue Stain轻轻混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但不宜超过10min)

2. 吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数500个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下:

细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%

 

注意事项:

1. Evans Blue Stain对人体有轻微毒性,请小心防护。

2. 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3. 血脑屏障通透性实验中,Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6个月有效。

 




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