伊文思蓝染色液（0.5）

伊文思蓝染色液(0.5%)

产品货号：R22115

产品规格：100ml/500ml

产品简介：

    伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式C₃₄H₂₄N₆Na₄O₁₄S₄，分子量为960.80，CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小不血浆白蛋白相近，而且在血液中不血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量，也可作动脉插管的定位。正常情况下血浆白蛋白无法透过血脑屏障，所以染色后如果神经系统血脑屏障完整，不血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其着色。相反，如果神经系统血脑屏障被破坏，依文思蓝就可以进入神经系统并使其着色。在荧光波长470nm、540nm处有强峰，680 nm处有弱峰。可以使用化学透析法和比色法进行检测。

伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞不活细胞，但无法区分死亡不坏死。

产品组成：

自备材料：

1.        注射器、组织匀浆器

2.        PBS

3.        三氯yi酸或丙酮

操作步骤(仅供参考)：

(一)血脑屏障通透性

1.        取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain (0.5%)数秒至1分钟内，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。

2.        脑组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,1000g离心15min。

3.        取上清，加入等量三氯yi酸，4℃孵育18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。

4.        1000g离心20～30 min或2000g离心15min。

5.        取上述溶液1～2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。

(二)活细胞染色

1.        取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，入100μl Evans Blue Stain轻轻混匀，染色 3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

2.        吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下:

细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

1.        Evans Blue Stain对人体有轻微毒性，请小心防护。

2.        细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3.        血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4.        最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5.        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。