一氧化氮合酶染色液
产品货号: R23143
产品规格:5×20ml/5×50ml
产品简介:
细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶(Nitxic oxide synthase,NOS)的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。还原型辅酶Ⅱ(NADPH)是一氧化氮合酶的辅酶,可将底物脱氢,然后将氢传递给硝基四氮唑蓝(NBT),NBT会被还原成蓝黑色沉淀,该沉淀部位即为NADPH所在部位即NOS部位。
尚宝生物 一氧化氮合酶染色液由磷酸盐缓冲、漂洗、孵育、复染等步骤,可用于组织冰冻切片染色,尤其适用于脑组织冰冻切片染色,亦可用于细胞爬片、细胞涂片染色。该染色液仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
名称 | 5×20ml | 5×50ml | 保存条件 |
试剂(A): Tissue PB buffer | 100ml | 250ml | 室温 |
试剂(B): Cell PB buffer | 50ml | 125ml | 室温 |
试剂(C): Wash buffer(6×) | 20ml | 50ml | 室温 |
试剂(D): NOS 孵育液 | 20ml | 50ml | -20℃,避光 |
试剂(E): 中性红染色液(可选) | 20ml | 50ml | 室温,避光 |
自备材料:
1. 30%蔗糖
2. 4%多聚甲醛
3. 湿盒、恒温箱、显微镜
操作步骤(仅供参考):
(一)、脑组织冰冻切片:
1. 动物常规灌注固定,取取脑组织,浸入30%蔗糖溶液,行冰冻切片厚度40μm。
2. 入Tissue PB buffer漂洗10min,重复1次。
3. 用蒸馏水稀释Wash buffer(6×)至1×,切片入1×Wash buffer,室温孵育60min。
4. 入NOS孵育液,并放入湿盒中,37℃避光孵育3h。
5. 用蒸馏水稀释Wash buffer(6×)至3×,切片入3×Wash buffer,4℃孵育过夜。
6. 入Tissue PB buffer,漂洗10min,重复1次。
7. 裱片、晾干。
8. 可选步骤:入中性红染色液复染1~2min。
9. 常规脱水、透明、封片、镜检。
(二)、细胞爬片:
1. 细胞爬片或甩片用Cell PB buffer漂洗5min,重复1次。
2. 4%多聚甲醛室温固定30min。
3. 入Cell PB buffer漂洗10min,重复1次。
4. 按上述脑组织冰冻切片步骤3~5操作。
5. 入Cell PB buffer漂洗10min,重复1次。
6. 可选步骤:入中性红染色液复染1~2min。
7. 封片、镜检。
染色结果:
NOS 部位 蓝黑色
背景 红色(中性红)或淡蓝色
注意事项:
1. 应选择恰当的固定液、固定方法、固定时间,否则会影响酶的活性。
2. 中性红复染可以更好的显示细胞轮廓,有助于进一步计数阳性细胞率。
3. 组织切片染色时,可见NOS神经元,类似于Golgi银染,胞体、神经纤维、纤维末梢均可着色。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。