一氧化氮合酶染色液

一氧化氮合酶染色液

产品货号: R23143

产品规格:5×20ml/5×50ml

产品简介：

细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶(Nitxic oxide synthase，NOS)的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。还原型辅酶Ⅱ(NADPH)是一氧化氮合酶的辅酶，可将底物脱氢，然后将氢传递给硝基四氮唑蓝(NBT)，NBT会被还原成蓝黑色沉淀，该沉淀部位即为NADPH所在部位即NOS部位。

尚宝生物 一氧化氮合酶染色液由磷酸盐缓冲、漂洗、孵育、复染等步骤，可用于组织冰冻切片染色，尤其适用于脑组织冰冻切片染色，亦可用于细胞爬片、细胞涂片染色。该染色液仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.        30%蔗糖

2.        4%多聚甲醛

3.        湿盒、恒温箱、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

(一)、脑组织冰冻切片：

1.        动物常规灌注固定，取取脑组织，浸入30%蔗糖溶液，行冰冻切片厚度40μm。

2.        入Tissue PB buffer漂洗10min，重复1次。

3.        用蒸馏水稀释Wash buffer(6×)至1×，切片入1×Wash buffer，室温孵育60min。

4.        入NOS孵育液，并放入湿盒中，37℃避光孵育3h。

5.        用蒸馏水稀释Wash buffer(6×)至3×，切片入3×Wash buffer，4℃孵育过夜。

6.        入Tissue PB buffer，漂洗10min，重复1次。

7.        裱片、晾干。

8.        可选步骤：入中性红染色液复染1～2min。

9.        常规脱水、透明、封片、镜检。

(二)、细胞爬片：

1.        细胞爬片或甩片用Cell PB buffer漂洗5min，重复1次。

2.        4%多聚甲醛室温固定30min。

3.        入Cell PB buffer漂洗10min，重复1次。

4.        按上述脑组织冰冻切片步骤3～5操作。

5.        入Cell PB buffer漂洗10min，重复1次。

6.        可选步骤：入中性红染色液复染1～2min。

7.        封片、镜检。

染色结果：

NOS 部位       蓝黑色

背景            红色(中性红)或淡蓝色

注意事项：

1.        应选择恰当的固定液、固定方法、固定时间，否则会影响酶的活性。

2.        中性红复染可以更好的显示细胞轮廓，有助于进一步计数阳性细胞率。

3.        组织切片染色时，可见NOS神经元，类似于Golgi银染，胞体、神经纤维、纤维末梢均可着色。

4.        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。