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一氧化氮合酶染色液

一氧化氮合酶染色液

简要描述:一氧化氮合酶染色液
细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶(Nitxic oxide synthase,NOS)的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。还原型辅酶Ⅱ(NADPH)是一氧化氮合酶的辅酶,可将底物脱氢,然后将氢传递给硝基四氮唑蓝(NBT),NBT会被还原成蓝黑色沉淀,该沉淀部位即为NADPH所在部位即NOS部位。

产品型号: R23143

所属分类:常规溶液

更新时间:2021-09-14

厂商性质:生产厂家

详情介绍

一氧化氮合酶染色液

产品货号: R23143

 

产品规格:5×20ml/5×50ml

 

产品简介:

细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶(Nitxic oxide synthaseNOS)的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。还原型辅酶Ⅱ(NADPH)是一氧化氮合酶的辅酶,可将底物脱氢,然后将氢传递给硝基四氮唑蓝(NBT)NBT会被还原成蓝黑色沉淀,该沉淀部位即为NADPH所在部位即NOS部位。

尚宝生物 一氧化氮合酶染色液由磷酸盐缓冲、漂洗、孵育、复染等步骤,可用于组织冰冻切片染色,尤其适用于脑组织冰冻切片染色,亦可用于细胞爬片、细胞涂片染色。该染色液仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

名称

5×20ml

5×50ml

保存条件

试剂(A): Tissue PB buffer

100ml

250ml

室温

试剂(B): Cell PB buffer

50ml

125ml

室温

试剂(C): Wash buffer(6×)

20ml

50ml

室温

试剂(D): NOS 孵育液

20ml

50ml

-20℃,避光

试剂(E): 中性红染色液(可选)

20ml

50ml

室温,避光

 

自备材料:

1.        30%蔗糖

2.        4%多聚甲醛

3.        湿盒、恒温箱、显微镜

 

操作步骤(仅供参考)

()、脑组织冰冻切片:

1.        动物常规灌注固定,取取脑组织,浸入30%蔗糖溶液,行冰冻切片厚度40μm

2.        Tissue PB buffer漂洗10min,重复1次。

3.        用蒸馏水稀释Wash buffer(6×),切片入1×Wash buffer,室温孵育60min

4.        NOS孵育液,并放入湿盒中,37℃避光孵育3h

5.        用蒸馏水稀释Wash buffer(6×),切片入3×Wash buffer4℃孵育过夜。

6.        Tissue PB buffer,漂洗10min,重复1次。

7.        裱片、晾干。

8.        可选步骤:入中性红染色液复染12min

9.        常规脱水、透明、封片、镜检。

()、细胞爬片:

1.        细胞爬片或甩片用Cell PB buffer漂洗5min,重复1次。

2.        4%多聚甲醛室温固定30min

3.        Cell PB buffer漂洗10min,重复1次。

4.        按上述脑组织冰冻切片步骤35操作。

5.        Cell PB buffer漂洗10min,重复1次。

6.        可选步骤:入中性红染色液复染12min

7.        封片、镜检。

 

染色结果:

NOS 部位       蓝黑色

背景            红色(中性红)或淡蓝色

 

 

注意事项:

1.        应选择恰当的固定液、固定方法、固定时间,否则会影响酶的活性。

2.        中性红复染可以更好的显示细胞轮廓,有助于进一步计数阳性细胞率。

3.        组织切片染色时,可见NOS神经元,类似于Golgi银染,胞体、神经纤维、纤维末梢均可着色。

4.        为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6个月有效。

 




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