乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)
目录编号:R23227
产品规格:3×20ml
产品简介:
胆碱酯酶(cholinesterase)属于特异性酯酶,可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase,AChE)又称为真性胆碱酯酶,能水解乙酰胆碱,起到生理的调节作用;另一类为胆碱酯酶,又称假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase,PsChE),能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处;PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内,生理功能尚不明确。显示乙酰胆碱酯酶的方法有Koell法、Snell和Garrett法、Karnovsky和Roots法等。
乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱,释放乙酸和硫代胆碱,磷酸盐与铅离子形成磷酸铅沉淀,再被S2+置换,形成硫化铅沉淀。其优点是操作简便、酯酶的扩散较少,其缺点是对底物对组织的渗透性较差,有可能出现假阳性。
产品组成:
产品组成 | 3×20ml | 保存温度 |
试剂(A):AChE孵育液 A1:AChE Iodide | 48mg | 4℃,避光 |
试剂(A):AChE孵育液 A2:AChE Buffer A | 2.04ml | 室温 |
试剂(A):AChE孵育液 A3:AChE Buffer B | 4.08ml | 4℃,避光 |
试剂(A):AChE孵育液 A4:AChE Buffer C | 4.08ml | 4℃,避光 |
试剂(A):AChE孵育液 A5:Iso-OMPA | 10.2ml | -20℃,避光 |
试剂(B):AChE漂洗液 | 2×20ml | 室温 |
试剂(C):AChE硫化液 | 2×1ml | 室温,避光 |
自备材料:
1. 10%甲醛钙固定液
2. 恒温培养箱
3. 光学显微镜
操作步骤:(仅供参考)
1. 冰冻切片,6μm,不固定或置于遇冷的10%甲醛钙固定。
2. 蒸馏水洗。
3. 临用前,将A1、A2、A3、A4、A5完全混合,即为A12混合液,3小时内使用。
4. 切片入预温的AChE孵育液中,避光孵育 (一般不超过70min)。
5. 蒸馏水洗,镜下观察如活性部位仍较淡,可于蒸馏水洗后再进行孵育,至反应合适为止。
6. 入AChE漂洗液充分漂洗,如AChE漂洗液用量过大,可用PBS代替。
7. 在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取适量的试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释, 即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入ALP硫化工作液,孵育。
8. 流水冲洗。甘油明胶封固。
染色结果:
AChE酶活性部位 | 棕黑色 |
细胞核 | 蓝色 |
阴性对照(可选):
取配制好的AChE孵育液,按AChE孵育液: AChE-ChE抑制剂充分混合。取相同切片入含AChE-ChE抑制剂的AChE孵育液中,其余同上,呈阴性反应。
注意事项:
1. 本染色液适用于冰冻切片,同时应减少切片在室温暴露的时间。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。