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酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)

酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)

简要描述:酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。

产品型号: R21904

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-09-08

厂商性质:生产厂家

详情介绍

酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)

产品货号:R21904

 

产品包装:2×50ml

 

产品简介:

    酸性磷酸酶(acid phosphataseACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH4.55.5

    尚宝生物 酸性磷酸酶染色液以β-甘油磷酸钠为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐,遇铅离子则生成磷酸铅沉淀,再被S置换,最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲,Cu2+,酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂,Mn离子为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可,但多用冰冻切片。临床上,该染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应,霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应,Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。

 

产品组成:

试剂名称

2×50ml

保存条件

试剂(A): ACP 孵育液

50ml

4℃,避光

试剂(B): ACP 硫化液

2×1ml

室温,避光

试剂(C): ACP 对照液

10nl

4℃,避光

 

自备材料:

1.        蒸馏水

2.        恒温箱

3.        封片剂

 

操作步骤(仅供参考)

()冰冻切片染色

冰冻切片至蒸馏水。

1.        切片入ACP孵育液,置于37℃温箱,浸染1560min

2.        37℃蒸馏水中洗2次,每次1min,以去除未被吸附的铅。

3.        在上述过程中配制ACP硫化工作液,即取试剂(B)用蒸馏水稀释50, 即为ACP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育12min

4.        流水冲洗35min,蒸馏水洗。

5.        (可选)核固红复染细胞核,蒸馏水洗。甘油明胶封片。

()石蜡切片染色

石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

1.        切片入ACP孵育液,置于37℃温箱,浸染412h,可以延长至24h

2.        37℃蒸馏水中洗2次,每次1min,以去除未被吸附的铅。

3.        在上述过程中配制ACP硫化工作液,即取试剂(B)用蒸馏水稀释50, 即为ACP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育12min

4.        流水冲洗35min,蒸馏水洗。

5.        (可选)核固红复染细胞核,蒸馏水洗。

6.        石蜡切片脱水,常规透明,中性树胶封片。

 

染色结果:                            

           酶活性部位       黑色硫化钴沉淀

             细胞核         根据复染液不同而不同

 

阴性对照(可选)

将切片置入试剂(C)--ACP对照液中,室温12h 孵育,其余步骤相同,结果为阴性。

 

注意事项:

1.        ACP 孵育液、ACP硫化液易失效,最好分成小分储存。ACP硫化液具有腐蚀性。

2.        对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

3.        样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。

4.        组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

5.        组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为5254℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。

6.        不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。

 

保存条件:

2-8℃避光,6个月有效。-20℃12个月有效。

 




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