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酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

简要描述:酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。

产品型号: R21905

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-09-08

厂商性质:生产厂家

详情介绍

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

产品货号:R21905

 

产品包装:4×2ml/4×10ml/4×20ml

 

产品简介:

    酸性磷酸酶(acid phosphataseACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH4.55.5

    尚宝生物 酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚不重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中。对某些酸性磷酸酶来讲,Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂,Mn2+为该酶的激活剂。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等,亦可用于石蜡切片。

 

产品组成:

试剂名称

4×2ml

4×10ml

4×20ml

保存条件

试剂(A)ACP固定液

10ml

50ml

100ml

4℃,避光

试剂(B)ACP孵育液

B1: AS-BI Buffer

0.2ml

1ml

2ml

-20℃,避光

B2: GBC染色液

0.02ml

0.1ml

0.2ml

4℃,避光

 B3: ACP Buffer

1.8ml

9ml

18ml

室温,避光

临用前,按 B1:B2:B3=10:1:90 混合,即为 ACP 孵育液,即配即用。

试剂(C):    Lea 苏木素染色液

2ml

10ml

20ml

4℃,避光

试剂(D):    甲基绿染色液 

2ml

10ml

20ml

室温,避光

 

自备材料:

1.        蒸馏水、恒温箱

2.        载玻片、推玻片

3.        光学显微镜

 

操作步骤(仅供参考)

()血液、细胞涂片:

1.        推片:取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上,推玻片于载玻片保持30度,置于血液或细胞滴液的正前方,稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。

2.        自然晾干,ACP固定液4℃固定30s3min,多数情况下3060s即可。

3.        水洗,稍微晾干(不易过分干燥)

4.        切片入ACP孵育液,置于37℃温箱,避光浸染4560min,水洗。

5.        复染:Lea苏木素染色液染色5min 或甲基绿染色液染色23min

6.        水洗、晾干、镜检。

()冰冻切片:

1.        冰冻切片回温至37℃,水中浸泡12min

2.        自然晾干,ACP固定液4℃固定13min

3.        水洗,稍微晾干(不易过分干燥)

4.        切片入ACP孵育液,置于37℃温箱,避光浸染4560min,水洗。

5.        复染:Lea苏木素染色液染色58min或甲基绿染色液染色23min

6.        水洗、晾干、镜检。

()石蜡切片:

1.        石蜡切片脱蜡510min,重复一次。

2.        无水乙醇5min90%乙醇和70%乙醇各2min

3.        水洗2min

4.        自然晾干,ACP固定液4℃固定30s3min,多数情况下3060s即可。

5.        水洗,稍微晾干(不易过分干燥)

6.        切片入ACP孵育液,置于37℃温箱,浸染4560min,水洗。

7.        复染:Lea苏木素染色液染色58min或甲基绿染色液染色23min

8.        水洗、晾干、镜检。

 

染色结果:

           阳性颗粒                 紫红色

            细胞核          蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

临床意义:

1.        毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性,且不被酒石酸抑制。

2.        急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性,原淋巴细胞呈弱阳性,原粒细胞对ACP反应不一。

3.        T淋巴细胞ACP染色呈阳性,颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。

4.        戈谢细胞呈强阳性,尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

 

注意事项:

1.        ACP孵育液易失效,本法宜用皮肤穿刺血涂片,晾干后应及时染色

2.        对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

3.        样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。

4.        组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

5.        组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为5254℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。

6.        不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。

7.        为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:

6个月有效。

 

 

 

 




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