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神经HRP示踪显色液(DAB法)

神经HRP示踪显色液(DAB法)

简要描述:尚宝生物 神经HRP示踪显色液(DAB法)是动物经麻醉、注入HRP后,游离或络合型的HRP不氧化剂反应生成络合物,该络合物氧化供氢的DAB显色剂,呈棕色,在显微镜下清晰可见。该显色液仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品型号: R23107

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-09-08

厂商性质:生产厂家

详情介绍

神经HRP示踪显色液(DAB)

产品货号:R23017

 

产品规格:50T

 

产品简介:

上个世纪70年代,KristensopnOlsson报道了HRP可神经末梢摄取,经轴浆逆行运输至神经元胞体,经组织化学方法可显示出神经元的轮廓,从而开发出HRP追踪神经元示踪技术,即为HRP法。DAB 3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下, DAB会产生棕色沉淀,该棕色沉淀不溶于水和乙醇,显色后呈棕色,可在显微镜下观察。

尚宝生物 神经HRP示踪显色液(DAB)是动物经麻醉、注入HRP后,游离或络合型的HRP不氧化剂反应生成络合物,该络合物氧化供氢的DAB显色剂,呈棕色,在显微镜下清晰可见。该显色液仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

产品名称

50T

保存条件

试剂(A): DAB assay buffer

2×500ml

室温,避光

试剂(B): DAB 显色液

30ml

-20℃,避光

试剂(C): DAB 增强剂

2×1ml

室温

试剂(D): DAB Wash buffer(20×)

100ml

室温

 

操作步骤(仅供参考)

()、准备工作

1.        动物麻醉:多用(3.5%)戊巴比妥na作为麻醉剂,大鼠的麻醉剂量为0.25-0.35ml/100g

2.        导入HRP:有压力注射法、电泳法以及周围神经系统的注射涂抹等法。

3.        确定动物存活期。

4.        动物灌注:麻醉后,经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。先用生理盐水或PBS快速灌注。随后用4%的多聚甲醛固定液灌注,先快后慢,时间控制在30-40min。最后用10%蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)

5.        取材:取组织置于20%的蔗糖磷酸盐缓冲液中,切片厚度40μm,存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。

()、显色反应

1.        配制DAB孵育液:取适量的DAB assay bufferDAB显色液,按DAB assay bufferDAB显色液=39:1的比例混合,即为DAB孵育液,即配即用,不宜保存。

2.        配制DAB显色工作液:取适量的DAB孵育液和DAB增强剂,按DAB孵育液:DAB增强剂=200080001的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定),即为DAB显色工作液,即配即用,不宜保存。

3.        配制1×DAB Wash buffer:取适量的DAB Wash buffer(20×),按DAB Wash buffer:蒸馏水=1:19的比例混合,即为 1×DAB Wash buffer。室温保存,6月有效。

4.        切片用蒸馏水清洗3次,每次2min

5.        切片入10ml DAB孵育液(提前20℃温育),避光孵育20min,其间不断晃动。

6.        切片入10ml DAB显色工作液(提前20℃温育),避光孵育20min,其间不断晃动。

7.        漂洗:取10ml左右的1×DAB Wash buffer漂洗切片2-3次,每次5min

8.        贴片,载玻片用铬明矾明胶包被,室温空气干燥。

9.        脱水、透明步骤按如下操作:

蒸馏水 10s

②70%乙醇 10s

③95%乙醇 10s

④100%乙醇2次,每次10s

二甲苯2次,每次25min

10.     中性树胶封片,显微镜下观察棕色反应。

 

注意事项:

1.        如果出现高的反应背景或沉淀,表明DAB底物反应过于强烈。

2.        所用器皿必须洁净,避免含有氧化剂或还原剂,否则会产生非特异性反应。

3.        DAB显色液避免反复冻融,以免显色效率下降。

4.        DAB增强剂注意密闭保存,否则显色效率下降。

 

有效期:12个月有效。

 




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