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抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

简要描述:抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的 溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种 动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。

产品型号: R22103

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-08-24

厂商性质:生产厂家

详情介绍

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

产品货号:R21903

 

产品包装:3×10ml

 

产品简介:

    酸性磷酸酶(acid phosphataseACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的 溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种 动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH4.55.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resis acid phosphataseTRAP) 均在细胞滤泡中,并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以 通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。

    尚宝生物 抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸 酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中,若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性,则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片,亦可用于冰冻切片、石蜡切片。

 

产品组成:

试剂名称

4×10ml

4×20ml

保存条件

试剂(A)TRAP固定液

50ml

100ml

4  避光

试剂(B)TRAP

孵育液       

B1AS-BI Buffer

1ml

2ml

-20  避光

B2GBC染色液  

0.1ml

0.2ml

4  避光


B3TRAP Buffer

9ml

18ml

室温  避光

临用前,按B1:B2:B3=10:1:90混合,即为TRAP孵育液,即配即用。

试剂(C)Lea 苏木素染色液    

10ml

20ml

4  避光

 

自备材料:

1.   蒸馏水、恒温箱

2.   载玻片、推玻片

3.   光学显微镜

 

操作步骤(仅供参考)

()血液、细胞涂片:

1.   推片:取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上,推玻片于载玻片保持30度,置于血液或细胞滴液的正前方,稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿 载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。

2.   自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s3min,多数情况下3060s即可。

3.   水洗,稍微晾干(不易过分干燥)

4.   切片入TRAP孵育液,置于37℃温箱,避光浸染4560min,水洗。

5.   复染:Lea苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色23min

6.   水洗、晾干、镜检。

()冰冻切片:

1.   冰冻切片回温至37℃,水中浸泡12min

2.   自然晾干,TRAP固定液4℃固定13min

3.   水洗,稍微晾干(不易过分干燥)

4.   切片入TRAP孵育液,置于37℃温箱,避光浸染4560min,水洗。

5.   复染:苏木素染色液染色58min或甲基绿染色液染色23min

6.   水洗、晾干、镜检。

()石蜡切片:

1.   石蜡切片脱蜡510min,重复一次。

2.   无水乙醇5min90%乙醇和70%乙醇各2min

3.   水洗2min

4.   自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s3min,多数情况下3060s即可。

5.   水洗,稍微晾干(不易过分干燥)

6.   切片入TRAP孵育液,置于37℃温箱,浸染4560min,水洗。

7.   复染:Lea苏木素染色液染色58min或甲基绿染色液染色23min

8.   水洗、晾干、镜检。

 

染色结果:

阳性颗粒              紫红色

细胞核                 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

 

临床意义:

1.   毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性,且不被酒石酸抑制,其他细胞 均呈阴性或极弱阳性。

2.   急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性,原淋巴细胞呈弱阳性,原粒细胞对ACP反应不一。

3.   T淋巴细胞ACP染色呈阳性,颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。

4.   戈谢细胞呈强阳性,尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

 

注意事项:

1.   TRAP孵育液易失效,本法宜用皮肤穿刺血涂片,晾干后应及时染色。

2.   对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

3.   样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。

4.   组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

5.   组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为5254℃的石蜡进行浸蜡,浸 蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。

6.   不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。

7.   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

2-8℃避光,6个月有效。

 




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