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碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)

碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)

简要描述:碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。

产品型号: R21900

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-08-12

厂商性质:生产厂家

详情介绍

碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)

产品货号:R21900

 

产品包装:3×50ml

 

产品简介:

     碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALPAKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

     尚宝生物 碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物,经酶水解释放出磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。

 

产品组成:

试剂名称

3×50ml

3×100ml

保存条件

试剂(A): ALP 孵育液

50ml

100ml

4℃  避光

试剂(B): 硝酸钴溶液

50ml

100ml

室温  避光

试剂(C): ALP 硫化液

2×1ml

3×1ml

室温  避光

试剂(D): ALP 对照液

10ml

20ml

4℃  避光

 

自备材料:

1.        蒸馏水

2.        温箱或水浴锅

 

操作步骤(仅供参考)

()石蜡切片染色

1.        石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

2.        切片入ALP孵育液中,37℃孵育2~12h

3.        流水洗2min,入蒸馏水。

4.        入硝酸钴溶液中,37℃孵育5min

5.        流水洗5min后,入蒸馏水。

6.        在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水稀释50, 即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min

7.        流水洗10min,入蒸馏水。

8.        (可选)核固红复染细胞核,蒸馏水洗。

9.        石蜡切片常规脱水、透明,树胶封片。

()冰冻切片染色

1.        冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内,4℃固定2~5min

2.        切片入ALP 孵育液,37℃孵育5~15min

3.        流水洗2min,入蒸馏水。

4.        入硝酸钴溶液,37℃孵育5min

5.        流水洗5min后,入蒸馏水。

6.        在上述过程中配制 ALP 硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50, 即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入ALP硫化工作液,孵育12min

7.        流水洗10min,入蒸馏水。

8.        (可选)核固红复染细胞核,蒸馏水洗。甘油明胶封片。

 

染色结果:

         酶活性部位                 黑色硫化钴沉淀

          细胞核                    根据复染液不同而不同

 

阴性对照(可选)

1.        ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液,其余同上。结果为阴性。

2.        (备选方案)切片进入 ALP 孵育液前,可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3min,充分水洗后再进行孵育等步骤,可用此法作阴性对照。

 

注意事项:

1.        ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小分储存,一经开启立即使用。

2.        ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。

3.        对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

4.        样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。

5.        组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过 24h,否则酶活性会减弱或消失。

6.        组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为5254℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。

7.        不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。

 

保存条件:

2-8℃避光,3个月有效。

 




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