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碱性磷酸酶-PAS联合染色液

碱性磷酸酶-PAS联合染色液

简要描述:碱性磷酸酶-PAS联合染色液
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称 ALP 或 AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。

产品型号: R22018

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-08-12

厂商性质:生产厂家

详情介绍

碱性磷酸酶-PAS 联合染色液

产品货号:R22018

 

产品规格:6×50ml

 

产品简介:

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称 ALP AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适 pH 9.29.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。1946 McManus 最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖。过碘酸 (高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的 1,2-乙二醇基使之变为二醛,醛与 Schiff 试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化。

尚宝生物 ALP-PAS 联合染色液不仅能够显示碱性磷酸酶活性位点和糖原等物质,亦能区分二者。冰冻切片及石蜡切片均可。

 

产品组成:


6×50ml


试剂(A): ALP 孵育液

50ml

4℃,避光

试剂(B): 硝酸钴溶液

50ml

室温

试剂(C): ALP 硫化溶液

2×1ml

室温,避光

试剂(D): 高碘酸溶液

50ml

4℃,避光

试剂(E): Schiff 试剂

50ml

4℃,避光

试剂(F): 亚硫酸溶液

50ml

室温

试剂(G): ALP 对照液

10ml

4℃,避光

 

自备材料:

1.        蒸馏水

2.        温箱或水浴锅

 

操作步骤:

1.        石蜡切片脱蜡至蒸馏水,冰冻切片直接入水。

2.        冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内,4℃固定 25min

3.        切片入 ALP 孵育液(阴性对照切片入 ALP 对照液) 置于 37℃温箱。冰冻切片孵育 515min,石蜡切片孵育 212h。流水洗 2min 后入蒸馏水。

4.        入硝酸钴溶液,置于 37℃温箱染色 5min 流水洗 5min 后入蒸馏水。

5.        上述过程中配制 ALP 硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水稀释 50 , 即为 ALP 硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育 2min

6.        流水洗 10min 后入蒸馏水。

7.        入高碘酸溶液,室温氧化 25min。蒸馏水换洗 3 次。

8.        Schiff 试剂,置于 37℃温箱染色 1030min

9.        按亚硫酸溶液 :蒸馏水=3:1 的比例配制亚硫酸工作液,清 3 次,每次 2min,入蒸馏水。

10.     冰冻切片直接用甘油明胶封片,石蜡切片脱水。常规透明,中性树胶封片。

 

染色结果:

碱性磷酸酶活性部位          黑色

PAS 阳性物质              紫红色

 

阴性对照(可选)

1.        ALP 对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入 ALP 对照液,其余同上。结果为阴性。

2.        (备选方案)切片进入 ALP 孵育液前,可先经碘液和 5%硫代硫酸钠溶液各 3min,充分水洗后再进行孵育等步骤,可用此法作阴性对照。

 

注意事项:

1.        本染色液适用于冰冻切片、石蜡切片。染色过程中注意控制高碘酸处理的时间,否则容易褪色。

2.        碱性磷酸酶显色后,经高碘酸应特别小心,严格控制时间,否则褪色。

3.        ALP 孵育液、ALP 硫化液易失效,最好分成小分储存,一经开启立即使用。

4.        ALP 硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。

5.        对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

 

保质期:有效期为 3个月。

 




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