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福尔根DNA染色液(Feulgen Stain)

福尔根DNA染色液(Feulgen Stain)

简要描述:福尔根DNA染色液(Feulgen Stain)
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等,其中经典的是Feulgen法, 该法是一种经典的酶组织化学法。

产品型号: R21570

所属分类:缓冲液

更新时间:2021-07-30

厂商性质:生产厂家

详情介绍

福尔根DNA染色液(Feulgen Stain

产品货号:R21570

 

产品规格:3×100ml

 

产品简介:

脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等,其中经典的是Feulgen, 该法是一种经典的酶组织化学法。

尚宝生物 Feulgen Stain原理在于DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团,所以凡含有DNA的部位就呈紫红色。该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键,因此RNA用此法处理后则分解,所以该法不适用于证明RNA

 

产品组成:

名称

3×100ml

保存条件

试剂(A): Schiff Reagent

100ml

4℃,避光

试剂(B): B1: 弱酸溶液

100ml

室温

   SO2 B2: 亚硫酸盐溶液

100ml

室温

 

自备材料:

1.        蒸馏水、系列乙醇

2.        恒温箱

 

操作步骤:(仅供参考)

(一)石蜡切片染色

1.        组织固定:Carnoy固定石蜡切片较好,10%福尔马林亦可,不宜采用Bouin固定液。

2.        配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸馏水=1:4配制,即取1份弱酸溶液、4份蒸馏水,充分混合,即获得弱酸工作液。

3.        石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

4.        入弱酸工作液,室温浸洗一下。

5.        切片入预热至60℃的弱酸工作液,孵育8min

6.        切片入室温的弱酸工作液中冲洗1min

7.        蒸馏水冲洗。

8.        切片入Schiff Reagent,室温避光染色30~60min

9.        在上述染色过程中,配制SO2水工作液。按弱酸溶液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=1:5:94配制,即取弱酸溶液1份、亚硫酸盐溶液5份、蒸馏水94份,充分混合,即配即用。

10.     用新鲜配制的SO2水工作液洗切片3次,每次90s

11.     蒸馏水中洗净。经系列乙醇脱水。二甲苯透明并封片。

(二)冰冻切片染色

1.        冰冻切片预处理:取1份乙酸、3份无水乙醇混合即为固定液,固定10min

2.        由无水乙醇脱水--逐级下行—蒸馏水。

3.        配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸馏水=1:4配制,即取1份弱酸溶液、4份蒸馏水,充分混合,即获得弱酸工作液。

4.        余下步骤同上述石蜡切片染色。

 

染色结果:

细胞核内DNA         红紫色

阴性对照: 将同样切片经上述步骤,只有步骤5改为入室温弱酸工作液,孵育15min。结果为细胞核DNA阴性。

 

注意事项:

1.        水解时间很重要,并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。

固定液              水解时间(min

Carnoy固定液              8min

Heiiy固定液               8min

Susa固定液                18min

福尔马林                  8min

Zenker                  5min

2.        注意Schiff Reagent的纯净程度,若变浅粉红亦可考虑使用,颜色变红则弃用。

3.        去除切片上多余Schiff Reagent的方法以SO2水洗为好。

4.        应做阴性对照试验。

 

有效期:6个月有效。

 

 




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