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结晶紫染色液操作步骤及注意事项讲解

发布时间: 2021-10-09  点击次数: 43次
  结晶紫染色液是革兰氏染色法中的一种成分。革兰阳性菌染色中,细胞经草酸铵结晶紫染色后再经Gram碘液处理,形成不溶性复合物,该复合物不能通过细胞壁,不易被脱色,所以保持紫色。染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定。
 
  操作步骤(仅供参考):
 
  1、 按实验具体要求操作或参考下列革兰氏染色的方法。
 
  2、 涂片:取待检细菌,于载玻片中央涂成薄层或者在载玻片上滴加少许无菌水,取菌与水混合均匀,涂成薄层。
 
  3、 干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥。
 
  4、 固定:手持载玻片一端,标本面朝上,在酒精灯的火焰外侧快速来回移动。
 
  5、 初染:滴加结晶紫染色液染色,清水冲洗去染色液。
 
  6、 媒染:滴加Gram碘液,并覆盖载玻片室温放置,水洗。
 
  7、脱色:滴加脱色液摇动,直至流下的脱色液不出现紫色为止,立即用水冲去脱色液,终止反应。
 
  8、 复染:滴加沙黄染色液染色,水洗。
 
  9、 干燥。镜检:置油镜观察。
 
  染色结果:革兰氏阳性菌:蓝色至紫色;革兰氏阴性菌:红色。
 
  注意事项:
 
  1、涂片之前,应事先在背面做好圆圈标记,以便判断后续试验的位置。
 
  2、待检细菌培养时间会影响染色,阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解,常呈阴性。
 
  3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
 
  结晶紫染色液配制:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。

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